Gen anpil avantaj nan mikwoskopi fluoresans de foton
1) Limyè longèdonn long gen mwens afekte pa gaye pase limyè longèdonn kout epi li ka byen fasil antre echantiyon an;
2) Molekil fliyoresan deyò plan fokal la pa eksite, sa ki pèmèt plis limyè eksitasyon rive nan plan fokal la, sa ki pèmèt limyè eksitasyon an antre pi fon espesimèn;
3) Limyè longèdonn tou pre-enfrawouj se mwens toksik nan selil pase limyè longèdonn kout;
4) Lè w ap obsève espesimèn lè l sèvi avèk yon mikwoskòp de foton, photobleaching ak fototoksisite fèt sèlman sou plan fokal la. Se poutèt sa, mikwoskòp de-foton yo pi apwopriye pase mikwoskòp sèl-foton pou obsève espesimèn epè, pou obsève selil k ap viv, oswa pou fè eksperyans fotobleaching pwen fiks.
Konesans sou mikwoskopi fluoresans konfokal
Prensip debaz mikwoskopi fliyoresan konfokal la: Sèvi ak yon sous limyè pwen pou eklere echantiyon an pou fòme yon ti tach limyè ki byen defini sou plan fokal la. Fliyoresans ki emèt pa tach la apre yo te eklere lantiy objektif la kolekte epi li retounen nan glas dichroic sou chemen limyè orijinal la. konstitye yon splitter gwo bout bwa. Espektromèt la voye fliyoresans lan dirèkteman nan detektè a. Gen yon pinhole devan sous limyè a ak detektè a, ki rele pinhole ekleraj la ak pinhole deteksyon respektivman. Dimansyon jeyometrik de yo konsistan, anviwon 100-200nm; parapò ak pwen limyè a sou plan fokal la, de yo konjige, se sa ki, pwen limyè a pase nan yon seri lantiy epi yo ka finalman konsantre sou pinhole ekleraj la ak pinhole deteksyon an menm tan an. Nan fason sa a, limyè ki soti nan avyon an fokal yo ka konsantre nan twou a deteksyon, pandan y ap limyè a gaye soti nan pi wo a oswa anba avyon an se bloke deyò twou a deteksyon epi yo pa ka imajine. Echantiyon an analize pwen pa pwen ak lazè a, ak tib fotomultiplikatè a dèyè pinhole deteksyon an tou jwenn imaj konfokal pwen pa pwen limyè ki koresponn lan, ki konvèti nan yon siyal dijital epi li transmèt nan òdinatè a, epi finalman rasanble. sou ekran an nan yon imaj konfokal klè nan tout plan fokal la. .
Chak imaj plan fokal se aktyèlman yon koup transvèsal optik echantiyon an. Sa a koup transvèsal optik toujou gen yon epesè sèten epi yo rele tou yon seksyon optik mens. Depi entansite limyè a nan konsantre a pi gran pase entansite limyè a nan ki pa konsantre, ak limyè a avyon ki pa fokal filtre pa pinhole a, pwofondè nan jaden nan sistèm konfokal la se apeprè zewo. Analyse nan direksyon aks Z ka reyalize optik tomografi, fòme vle Obsève seksyon optik ki genyen de dimansyon nan plas la konsantre nan echantiyon an. Lè w konbine optik XY avyon (avyon fokal) ak optik Z-aks (aks optik), akimile nivo kontinyèl imaj ki genyen de dimansyon ak trete yo ak lojisyèl òdinatè espesyalize, yo ka jwenn yon imaj ki genyen twa dimansyon echantiyon an.
Sa vle di, pinhole deteksyon an ak pinhole sous limyè yo toujou konsantre sou menm pwen an, se konsa ke fluoresans eksite deyò avyon an konsantre pa ka antre nan pinhole deteksyon an.
Ekspresyon an senp nan prensip la k ap travay nan konfokal lazè se ke li sèvi ak lazè kòm sous la limyè. Sou baz tradisyonèl D' mikwoskòp fliyoresan, yo ajoute yon aparèy optik lazè ak yon aparèy konsantre konjige, epi sistèm nan kontwole pa yon òdinatè pou kolekte ak trete imaj dijital yo.
