Pwosedi estanda pou kalibre polarizateur nan yon mikwoskòp polarize
Mikwoskòp fliyoresan diferan de mikwoskòp optik òdinè paske li pa obsève espesimèn anba ekleraj sous limyè òdinè. Olye de sa, li itilize yon sèten longèdonn limyè (anjeneral limyè iltravyolèt, limyè ble vyolèt) pou eksite sibstans ki fliyoresan andedan echantiyon an anba mikwoskòp la, sa ki lakòz yo emèt fliyoresans. Se poutèt sa, wòl sous limyè a nan mikwoskòp fliyoresan se pa ekleraj dirèk, men kòm yon sous enèji eksite sibstans ki fliyoresan andedan echantiyon an. Rezon ki fè nou ka obsève espesimèn yo se pa akòz lumières sous limyè a, men fenomèn fliyoresan ekspoze pa sibstans ki sou fliyoresan andedan echantiyon an apre absòbe enèji limyè eksite a. Soti nan sa a, li ka wè ke karakteristik nan mikwoskospi fliyoresan se sitou ke sous limyè li yo ka bay yon gwo kantite limyè eksitasyon nan yon seri longèdonn espesifik, se konsa ke sibstans ki sou fliyoresan nan echantiyon an ka jwenn entansite ki nesesè nan limyè eksitasyon. An menm tan an, mikwoskòp fliyoresan yo dwe gen sistèm filtre korespondan. Mikwoskòp fluoresans se yon zouti fondamantal nan chimi tisi fluoresans. Li konpoze de eleman prensipal tankou yon sous limyè ultra-wo vòltaj, yon sistèm filtre (ki gen ladan plak eksitasyon ak suppression filtre), yon sistèm optik, ak yon sistèm fotografi. Li itilize limyè ki gen yon longèdonn sèten pou eksite echantiyon an epi emèt fliyoresans.
1. Metòd eksitasyon fluoresans: Dapre ranje longèdonn limyè a, gen de kalite: metòd eksitasyon UV (lè l sèvi avèk limyè iltravyolèt) ak metòd eksitasyon BV (lè l sèvi avèk limyè ble vyolèt). Metòd eksitasyon UV itilize tou pre limyè iltravyolèt ki pi kout pase 400nm pou eksitasyon. Metòd sa a pa gen limyè eksitasyon vizib, kidonk fliyoresans obsève a montre fliyoresans nannan nan lank la, sa ki fè li fasil pou distenge fliyoresans espesifik sou echantiyon an ak fliyoresans pwòp tèt ou nan tisi a background.
2. BV eksitasyon metòd: Li enplike eksitasyon soti nan iltravyolèt limyè ble santre nan 404nm ak 434nm. Metòd sa a sèvi ak limyè ble pou iradyasyon echantiyon an, kidonk filtè koupe -nan sistèm obsèvasyon fliyoresans lan dwe itilize yon filtè ki ka konplètman bloke limyè ble epi pase konplètman nan fliyoresans vèt ak jòn ki nesesè yo. Pigman fliyoresan yo itilize pou metòd antikò fliyoresan. Longèdonn maksimòm absòpsyon limyè eksitasyon ak longèdonn maksimòm emisyon fliyoresan yo relativman pre, kidonk filtè ki itilize nan metòd eksitasyon BV dwe itilize yon filtè koupe byen file. Metòd sa a ka itilize limyè ble kòm limyè eksitasyon, kidonk efikasite absòpsyon pigman fliyoresan yo wo, epi yo ka jwenn imaj pi klere. Dezavantaj la se ke fliyoresans anba a 500nm pa ka wè, pandan y ap fluoresans pi wo a 500nm fè imaj la tout antye parèt jòn. Nan metòd la antikò fliyoresan, spesifik la sitou detèmine pa koulè a inik nan pigman fliyoresan, kidonk lè w ap diskite sou espesifik espesifik, dezavantaj yo nan metòd la eksitasyon BV mansyone pi wo a souvan gen yon enpak siyifikatif.
