Teknik tach ak obsèvasyon mikwoskopik nan mikwo-òganis
Senp tach bakteri
1 Objektif
1.1 Pou aprann teknik debaz yo nan fwoti mikwòb ak tach.
1.2 Pou metrize metòd la tach senp nan bakteri.
1.3 Pou rive konnen karakteristik mòfolojik bakteri yo, ak konsolide aprantisaj itilizasyon glas lwil oliv ak teknik operasyon aseptik.
2 Prensip Fwoti ak tach bakteri se yon teknik debaz nan eksperyans mikrobyoloji. Selil bakteri yo piti ak transparan, yo pa fasil pou rekonèt anba mikwoskòp limyè òdinè, epi yo dwe tache. Sèvi ak yon sèl lank pou tache bakteri yo, se konsa ke òganis la tache ak background nan yo fòme yon diferans koulè klè, se konsa ke mòfoloji yo ak estrikti yo ka obsève pi klè. Metòd sa a fasil pou fè epi li apwopriye pou obsèvasyon fòm jeneral òganis lan ak aranjman bakteri yo. Koloran alkalin yo souvan itilize pou tach senp, paske nan solisyon net, alkalin oswa fèb asid, selil bakteri yo anjeneral chaje negatif, epi lè koloran alkalin yo ionize, pòsyon nan tach nan molekil yo chaje pozitivman, kidonk pòsyon nan tach nan koloran alkalin. ka fasilman mare nan bakteri yo fè bakteri yo koulè. Selil bakteri ki tache yo contraste sevè ak background nan epi yo pi fasil yo rekonèt anba mikwoskòp la. Koloran yo souvan itilize pou tach senp yo enkli merocyanine ble, kristal vyolèt, ak konpoze debaz wouj. Lè dekonpozisyon bakteri sik nan pwodwi asid pou pH mwayen an diminye, chaj la pozitif nan bakteri yo ogmante, ak Lè sa a, yo ka itilize nan wouj, asid wouj oswa Kongo wouj ak lòt koloran asid tach. Bakteri yo dwe fiks anvan tach. Objektif li se de: youn se touye bakteri yo epi fè bakteri yo konfòme yo ak glise a; dezyèm lan se ogmante afinite li pou lank la. De metòd yo souvan itilize: chofaj ak fiksasyon chimik. Eseye kenbe mòfoloji orijinal la nan selil yo lè fikse.
3 Materyèl
3.1 Souch Bacillus subtilis 12-18h kilti slant agar eleman nitritif, Staphylococcus aureus sou 24h kilti slant agar eleman nitritif, Escherichia coli 24h kilti slant agar eleman nitritif, kilti slant agar ledven boulanje.
3.2 Tach Lue a alkalin methylene ble tach (oswa amonyòm oksalat kristal vyolèt tach), asid kabòn konpoze wouj tach.
3.3 Enstriman oswa lòt ekipman Mikwoskòp, lanp alkòl, glise, bag inokulasyon, detantè glise, boutèy doub kouch (plen ak lwil sèd ak ksilèn), papye mikwoskòp, saline fizyolojik oswa dlo distile, elatriye.
4 Pwosedi Fwoti → siye → fikse → tach → lave → siye → egzamen mikwoskopik.
5 Etap
5.1 fwoti Pran de glisad pwòp ak lwil oliv, yo chak ak yon ti gout saline (oswa dlo distile) nan sant la nan glise a nan kondisyon aseptik, ak yon bag inokulasyon opere aseptik, respektivman, nan Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus. ak Escherichia coli slant chwazi yon ti bab panyòl nan gout dlo a, melanje ak kouvwi ak yon fim. Si sispansyon bakteri an (oswa kilti likid) fwoti, yo ka itilize yo vaksinen bag la chwazi 2 a 3 bag dirèkteman sou glise a. Remake byen ke saline a (dlo distile) epi pran bakteri yo pa ta dwe twòp epi gaye respire, pa twò epè.
5.2 Siye Sèch natirèlman nan tanperati chanm. Li kapab tou cheche pa chofe yon ti kras pi wo a yon lanp alkòl ak bò kouvwi anlè. Sepandan, pa jwenn twò pre flanm dife a, paske tanperati a twò wo pral detwi mòfoloji bakteri yo.
5.3 Fiksasyon Si yo itilize siye chalè, fikse ak siye yo konbine nan yon sèl etap menm jan ak siye. Fwoti, sèk ak chalè ranje.
5.4 Tach Mete glise a plat sou etajè glise a, ajoute 1 a 2 gout nan solisyon tach sou fwoti a (solisyon an tach jis kouvri fim nan fwoti ki apwopriye). Tach fwoti a ak Mellanox Blue Lü a pou 1 ~ 2min, epi ak Carbonate Wouj (oswa Amonyòm Oxalate Crystal Vyolèt) pou apeprè 1min.
5.5 Rense Vide solisyon tach la epi rense dousman avèk dlo tiyo soti nan yon bout nan glisad la jiskaske dlo a k ap koule soti nan froti a pa gen koulè. Lè w rense, pa kite dlo a koule dirèkteman pou lave sifas kouvwi a. Koule dlo a pa ta dwe twò rapid oswa twò gwo pou fè pou evite depoze fim nan fwoti.
5.6 Siye Souke ti gout dlo yo sou glise a pou seche natirèlman, yo ka sèvi ak papye sèk oswa absòbe pou absòbe sèk (fè atansyon pa siye kò bakteri an). 5.7 Egzamen mikwoskopik Yo sèk fwoti a epi yo egzamine pa mikwoskopi. Fwoti a dwe sèk nèt anvan li ka obsève ak yon mikwoskòp lwil oliv.
6 Rezilta Trase mòfoloji E. coli ak Micrococcus garciniae apre yon sèl tach.
Gram tach
1 Objektif
1.1 Pou konprann prensip tach Gram ak enpòtans li nan klasifikasyon ak idantifikasyon bakteri.
1.2 Pou aprann ak metrize teknik Gram tach la ak konsolide aprantisaj la nan itilizasyon lantiy lwil oliv nan mikwoskòp limyè a.
