Prensip ak karakteristik estriktirèl nan mikwoskòp fliyoresan
Sous limyè fluoresans la jeneralman itilize yon lanp mèki ultra-wo presyon (50-200 W), ki emèt limyè nan longèdonn divès kalite. Sepandan, chak sibstans fliyoresan gen yon longèdonn eksitasyon espesifik ki jenere fliyoresans entans. Pou rezon sa a, yon filtè eksitasyon (tipikman disponib nan kalite iltravyolèt, vyolèt, ble ak vèt) oblije pèmèt sèlman limyè eksitasyon nan yon longèdonn espesifik pase nan ak iradyasyon echantiyon an, pandan y ap absòbe tout lòt longèdonn.
Lè limyè eksitasyon iradyasyon, chak sibstans emèt fliyoresans vizib ak yon longèdonn ki pi long pase limyè eksitasyon an nan yon tan trè kout. Fliyoresans trè espesifik epi jeneralman pi fèb pase limyè eksitasyon an. Pou obsève fluoresans espesifik sa a, yo dwe enstale yon filtè baryè (oswa repwesyon) dèyè lantiy objektif la. Li sèvi de rezon: premye, li absòbe ak bloke limyè eksitasyon soti nan k ap antre nan oculaire a pou fè pou evite entèfere ak obsèvasyon fluoresans ak domaje je yo; Dezyèmman, li oaza transmèt fliyoresan espesifik yo pwodwi yon koulè fliyoresan distenk. De kalite filtè yo dwe chwazi ak itilize nan pè matche.
Mikwoskòp fliyoresan yo divize an de kalite ki baze sou chemen optik yo:
1. Transmèt-limyè Fluoresan Mikwoskòp
Nan konsepsyon sa a, sous limyè eksitasyon an pase nan kondansasyon an ak materyèl echantiyon an pou eksite fliyoresans. Yon kondansasyon jaden nwa yo souvan itilize, menm si yon kondansasyon estanda ka aplike tou; se glas la reflete ajiste redireksyon ak bò-irradiation limyè eksitasyon an sou echantiyon an. Sa a se yon kalite relativman pi gran nan mikwoskòp fliyoresan. Avantaj li se fluoresans fò nan agrandisman ki ba, pandan y ap dezavantaj li se ke entansite fliyoresans diminye kòm agrandisman ogmante. Se poutèt sa li pi byen adapte pou obsève pi gwo materyèl echantiyon.
2. Epifluorescence Mikwoskòp
Sa a se yon modèn, ki fèk devlope kalite mikwoskòp fluoresans. Kontrèman ak konsepsyon limyè transmèt la, limyè eksitasyon pwojte desann atravè lantiy objektif la sou sifas echantiyon an - menm lantiy objektif la sèvi tou de kondansasyon ekleraj la ak objektif kolekte fluoresans la. Yon dichroic beamsplitter enstale nan chemen an optik nan yon ang 45 degre aks optik la. Limyè eksitasyon reflete nan lantiy objektif la epi konsantre sou echantiyon an. Fliyoresans ki te pwodwi pa echantiyon an, ansanm ak limyè eksitasyon ki reflete nan sifas lantiy objektif ak kouvèti, ansanm antre nan lantiy objektif la epi retounen nan dichroic beamsplitter, ki separe limyè eksitasyon ak fliyoresans. Lè sa a, limyè eksitasyon ki rete a absòbe filtè baryè a.
Lè yo chanje blòk filtre ak konbinezon diferan nan filtre eksitasyon, dichroic beamsplitter ak filtè baryè, kondisyon yo pou diferan pwodwi reyaksyon fliyoresan ka satisfè. Avantaj ki genyen nan sa a kalite mikwoskòp fliyoresan gen ladan limyè inifòm jaden, D byen file, ak ogmante entansite fliyoresans nan pi wo agrandisman.
