Lazè konfokal mikroskopi - Karakteristik ak aplikasyon
Lazè eskanè konfokal mikwoskòp (LSCM) se yon kalite mikwoskòp ki fèt ki baze sou teknoloji konsantre konjige, se sa ki, sous limyè lazè a, echantiyon an yo dwe mezire, ak detektè a yo tout nan pozisyon konjige youn ak lòt.
Fondamantal
Nan yon mikwoskòp jeneral, plan obsèvasyon imaj la izole soti nan plan axial adjasan a lè li koincide plan fokal lantiy objektif la ak detektè a, pandan y ap nan yon mikwoskòp konfokal, yo itilize yon plas limyè ki limite difraksyon pou eklere echantiyon an ak A. pinhole yo itilize nan chemen limyè kolekte nan konsantre konjige nan plas limyè a pou filtre limyè ki pèdi pou kreye efè izolasyon sa a epi kidonk amelyore rezolisyon an.
Karakteristik D '
Seksyon optik optik D
Yon lòt karakteristik nan mikroskopi konfokal lazè optik se ke li se yon teknoloji D optik. Teknoloji ekleraj tradisyonèl lajè jaden an eklere echantiyon an antye, kidonk imaj la ka kaptire dirèkteman pa je nu oswa yon detektè, men LSCM sèvi ak yon gwo bout bwa oswa plizyè travès konsantre pase nan echantiyon an pou eskane ak imaj. Imaj la ki kapab lakòz yo rele yon seksyon optik. Sa ki anba la a montre diferans ki genyen ant metòd ekleraj tradisyonèl lajè-jaden ak metòd ekleraj konfokal lazè optik.
Se poutèt sa, yon metòd k ap travay aktyèl nan yon mikwoskòp konfokal modèn se jan yo montre nan figi ki anba a. Limyè eksitasyon ki emèt pa lazè a pase nan yon glas dichroic epi yo analize nan direksyon x ak direksyon y echantiyon an atravè yon pè galvanomètr. Eksitasyon an (oswa refleksyon) echantiyon an se Limyè antre nan detektè PMT la nan pinhole la epi li anrejistre, epi yon òdinatè rekonstwi imaj la analize anrejistre pou rekonstwi imaj echantiyon aktyèl la.
Jenere imaj "z-stack" sou diferan plan fokal
Se sèlman limyè a reflete tounen soti nan kouch echantiyon konjige a ka pase nan ti twou a nan chemen an limyè koleksyon, ak rès refleksyon yo ki pa enpòtan kouch echantiyon yo bloke pa ti twou a. Sa ka lakòz amelyorasyon siyifikatif nan rezolisyon an. Konparezon kòt a kòt nan mikwoskospi fliyoresan miltidimansyonèl ak mikwoskospi konfokal nan menm echantiyon an epè. Lè yo pran yon seri imaj nan diferan plan fokal, imaj yo souvan refere yo kòm "z-stacks" yo ka pwodwi, ki ilistre rezolisyon ak pwogrè kontras yo ofri nan mikwoskospi konfokal ak kòz ki kache nan pwogrè sa yo. Li ka wè ke egzamine imaj la nan tèt chemine a ak avyon an D 'anwo tisi a revele yon gwo kantite limyè gaye nan imaj la fluoresans, tandiske imaj la mikwoskopi konfokal parèt nwa. Rediksyon sa a nan PSF axial dirèkteman rezilta nan diferans lan rezolisyon obsève nan koòdone nan optik nan mitan an nan z-pile a.
Rezolisyon amelyore anpil konpare ak ekleraj widefield
Nan mikwoskospi fliyoresan, entansite limyè ki emèt soti nan yon sèl pwen dekri nan fonksyon an gaye pwen (PSF), ak modèl li yo se yon disk Airy. Ka rezolisyon an nan sistèm nan fliyoresan dwe dekri pa reyon an nan disk la Airy, ki ka dekri pa Ouverture a nimerik nan lantiy la objektif ak longèdonn nan limyè a eksitasyon detèmine.
