Konesans nan mikwoskòp fliyoresan konfokal la
Prensip debaz mikwoskopi fluoresans konfokal la: yo itilize yon sous limyè pwen pou iradyasyon echantiyon an, fòme yon ti pwen limyè ki byen defini sou plan fokal la; fliyoresans ki emèt soti nan pwen sa a apre iradyasyon kolekte pa lantiy la objektif epi li voye tounen sou chemen limyè iradyasyon orijinal la nan beamsplitter la ki fòme ak yon glas kromatik bi-direksyon. Splitter gwo bout bwa a voye fliyoresans lan dirèkteman nan detektè a. Tou de sous limyè a ak detektè a chak gen yon pinhole devan yo, yo rele pinhole ekleraj la ak pinhole deteksyon an, respektivman. Tou de gen menm jeyometri a, apeprè 100-200 nm, epi yo konjige parapò ak pwen limyè a sou plan fokal la, sa vle di, pwen limyè a pase nan yon seri lantiy epi finalman ka konsantre sou tou de limyè a. ak detektè pinholes. Nan fason sa a, limyè ki soti nan plan fokal la ka konvèje nan ouvèti a pwofonde, pandan y ap limyè gaye soti nan pi wo a oswa anba avyon an se bloke deyò ouvèti a sond epi yo pa ka imajine. Lazè a analize echantiyon an pwen pa pwen, ak tib la fotomultiplikatè apre detekte pinhole a tou jwenn imaj la konfokal nan pwen an korespondan limyè pwen pa pwen, ki se konvèti nan yon siyal dijital epi transmèt nan òdinatè a, epi finalman konvèje nan yon klè. imaj konfokal tout plan fokal la sou ekran an.
Chak imaj avyon fokal se aktyèlman yon koup transvèsal optik nan echantiyon an, ak koup transvèsal optik sa a toujou gen yon epesè sèten, ke yo rele tou yon fèy optik. Depi entansite limyè a nan pwen fokal la pi gran pase sa ki nan pwen ki pa fokal la, epi limyè avyon ki pa fokal la filtre pa pinhole a, pwofondè jaden sistèm konfokal la apwoksimatif pou zewo, ak optik. sou direksyon aks Z a pèmèt tomografi optik fòme yon tranch optik ki genyen de dimansyon nan echantiyon an yo dwe obsève nan plas la fokal. Konbine optik XY avyon (avyon fokal) ak optik Z-aks (aks optik), yo ka jwenn yon imaj ki genyen twa dimansyon nan echantiyon an nan akimile kouch siksesif nan imaj ki genyen de dimansyon, ki trete pa lojisyèl òdinatè espesyalize.
Sa vle di ke pinhole deteksyon an ak pinhole sous limyè yo toujou konsantre nan menm pwen an, se konsa ke fluoresans eksite deyò avyon an fokal pa ka antre nan pinhole deteksyon an.
Prensip k ap travay nan konfokal lazè tou senpleman eksprime ke li itilize lazè kòm yon sous limyè, sou baz tradisyonèl mikwoskòp fliyoresan D, adisyonèl aparèy optik lazè ak aparèy konsantre konjige, atravè kontwòl òdinatè pote soti nan akizisyon imaj dijital ak sistèm pwosesis.
