Ki jan ou ka chwazi bon mikwoskòp konfokal pou ou? Èske gen nenpòt metòd espesifik?
Mikwoskopi konfokal gen plis avantaj pase mikwoskospi widefield. Mikwoskopi konfokal ka fè seksyon optik kontinyèl echantiyon yo epi eskli entèferans siyal nan avyon ki pa fokal. Pou rezon sa a, aplikasyon an nan mikwoskòp konfokal se tout bon pi komen. Sepandan, gen pi plis ak plis mikwoskòp konfokal sou mache a. Ki jan yo chwazi?
Mikwoskopi konfokal gen plis avantaj pase mikwoskospi widefield. Mikwoskopi konfokal ka fè seksyon optik kontinyèl nan echantiyon yo epi eskli entèferans siyal nan avyon ki pa fokal. Pou rezon sa a, mikwoskopi konfokal se vre pi komen. Sepandan, gen pi plis ak plis mikwoskòp konfokal sou mache a. Ki jan yo chwazi? Lè w ap chwazi yon mikwoskòp konfokal, gen de konsiderasyon debaz ak enpòtan: ki kalite echantiyon ou vle etidye (pa egzanp, selil fiks oswa vivan), ak kalite tès ou vle fè (pa egzanp, pwosesis selilè estatik oswa dinamik).
D 'konfokal nan selil fiks yo
Pou imaj selil oswa tisi fiks ak tache, nou jeneralman chwazi konfokal optik lazè (LSCM). Sa a se sitou paske selil mouri fiks yo manke evènman byolojik rapid nan selil vivan epi yo ka pi byen benefisye de rezolisyon an espasyal ki pi wo nan LSCM. D ' LSCM se optik tranch echantiyon an pa lazè, ak vitès la optik (ki depann sou vitès la nan glas la etalaj optik) se jeneralman 1fps. Tan ekspoze ki pi long vle di yon pi gwo risk pou fotoblanchiman, men pou selil ki mouri fiks tan pa kritik epi nou ka mwayèn li soti nan pran plizyè foto.
D 'konfokal nan selil vivan yo
Imaj selil vivan yo mande plis pwoteksyon kont anviwònman ki pa zanmitay. Lè D ', premye konsiderasyon nou an se kenbe viabilite selil ak sante. Eleman chofaj tanperati konstan ak sistèm perfusion yo esansyèl, espesyalman pou etid time-lapse. Evènman byochimik rapid ki kontwole eta fizyolojik selil vivan yo se sa pifò moun vle etidye, men evènman sa yo twò vit pou LSCM konvansyonèl yo. Anplis de sa, ekspoze pwolonje nan LSCM tou pwovoke domaj limyè toksik nan selil yo. Se poutèt sa, imaj selil vivan mande pou mikwoskòp konfokal espesyal.
Gen jeneralman de opsyon pou D 'konfokal nan selil k ap viv: rapid optik lazè optik konfokal ak k ap vire disk konfokal. Mikwoskospi konfokal pou eskanè rapid ranplase miwa galvanomètr ki pi dousman ak miwa optik sonan ki pi rapid, sa ki pèmèt vitès eskanè jiska 30fps; pandan y ap vire disk konfokal (SDCMs) gen avantaj nan optik pi vit (byenke inevitableman nan yon pèt rezolisyon espasyal), vitès li yo ka teyorikman rive nan 2000fps (nan pratik li souvan limite pa lòt faktè).
Si w gen enkyetid sou photobleaching oswa siyal fluoresans trè fèb, Lè sa a, SDCM ka pi apwopriye. SDCM sèvi ak de wotasyon disk ak microwells etalaj pou dispèse limyè eksitasyon an. Kontrèman ak LSCM, ki analize tach echantiyon an, SDCM achte plizyè tach nan yon moman (apeprè 100 tach pixel), kidonk vitès la ogmante anpil, ak photobleaching nan SDCM ak mwens fototoksisite. Sepandan, ou ka tou itilize konfokal rapid optik pou ogmante vitès optik, konbine avèk detektè trè sansib, epi redwi enèji limyè eksitasyon pou diminye fototoksisite, ki ka kenbe fonksyon rich nan konfokal tradisyonèl yo.
Sistèm D' konfokal otomatik
Gen kèk chèchè renmen jwenn fason pou modifye mikwoskòp la adapte bezwen endividyèl yo. Ak kèk chèchè yo pa menm enterese nan ki jan mikwoskòp aktyèlman travay. Pou lèt la, yon mikwoskòp konfokal otomatik ka plis nan gou yo. Pa egzanp, Olympus FluoViewFV10i se yon mikwoskòp konfokal lazè totalman otomatik 4-. Kontra enfòmèl ant estrikti entegre li yo mande pou prèske pa gen okenn espas enstalasyon. Sa a kalite enstriman se ideyal pou chèchè ki bezwen fè anpil akizisyon done imaj chak jou, men nan kou yo pa konplètman reflete fonksyonalite a ak fleksibilite nan konfokal tradisyonèl yo. Anplis de sa, NikonA1 a se tou yon sistèm konfokal totalman otomatik. Tankou pifò mikwoskòp optik konfokal konvansyonèl yo, NikonA1 sèvi ak yon tèt eskanè galvanomèt, ki gen yon rezolisyon ki pi wo pase A1R ak yon tèt eskanè ibrid, men yon vitès yon ti kras pi dousman (A1R ~ 30fps)
