Diferans ant yon mikwoskòp fluoresans ak yon mikwoskòp nòmal
Mwen dènyèman te eseye fè kèk seksyon nan frizè nan sourit. Apre sa, mwen pral sèvi ak yon mikwoskòp fliyoresan pou wè si viris mwen te enjekte a nan zòn nan sèvo mwen vle a. Gen kèk prensip debaz nan mikwoskopi fluoresans bezwen aprann yon ti tan, epi mwen pral pataje yo isit la.
Mikwoskòp fliyoresan itilize limyè iltravyolèt kòm yon sous limyè pou limine objè a ke yo te enspekte, sa ki lakòz objè a emèt limyè, ak Lè sa a, obsève objè a anba mikwoskòp la. Li se sitou itilize pou selil imunofluorescence. Li se sitou ki konpoze de yon sous limyè, yon sistèm plak filtre ak yon sistèm optik. Imaj fliyoresan echantiyon an obsève atravè agrandisman okilè a ak lantiy objektif la. Ann pran yon gade nan diferans ki genyen ant yon mikwoskòp fliyoresan ak yon mikwoskòp optik òdinè.
1. Gade metòd ekleraj la
Metòd ekleraj la nan mikwoskòp fluoresans se jeneralman epi-ekleraj, ki vle di ke yo mete sous limyè a sou echantiyon tès la atravè lantiy objektif la.
2. Gade rezolisyon an
Mikwoskòp fliyoresan itilize limyè iltravyolèt kòm yon sous limyè, ki gen yon longèdonn ki pi kout men pi wo rezolisyon pase mikwoskòp optik òdinè.
3. Diferans nan filtè
Mikwoskòp fliyoresan yo itilize de filtè espesyal, youn ki itilize devan sous limyè a pou filtre limyè vizib, ak youn ki itilize ant lantiy objektif la ak oculaire pou filtre reyon iltravyolèt, ki ka pwoteje je moun.
Mikwoskòp fliyoresan se tou yon kalite mikwoskòp optik. Rezon prensipal ki fè se ke longèdonn eksite pa mikwoskòp fliyoresan se kout, kidonk sa a mennen nan diferans lan nan estrikti ak itilizasyon ant mikwoskòp fluoresans ak mikwoskòp òdinè. Pifò mikwoskòp fliyoresan gen bon fonksyon pou kaptire limyè fèb. , kidonk kapasite D li yo bon tou anba fliyoresans trè fèb. Makonnen ak amelyorasyon kontinyèl nan mikwoskòp fliyoresan nan dènye ane yo, bri a te tou redwi anpil. Se poutèt sa, pi plis ak plis mikwoskòp fliyoresan yo te itilize.
Konesans sou mikwoskopi fluoresans de foton
Prensip debaz eksitasyon de foton se: anba kondisyon dansite foton segondè, molekil fliyoresan ka absòbe de foton longèdonn long an menm tan an, epi apre yon kout lavi eta sa yo rele eksite, emèt yon foton ak yon longèdonn ki pi kout. . ;Efè a se menm jan ak lè l sèvi avèk yon foton ak yon longèdonn mwatye longèdonn long la eksite molekil fliyoresan. De-foton eksitasyon mande pou yon gwo dansite foton. Yo nan lòd yo pa domaje selil yo, mikwoskòp de foton sèvi ak lazè batman ki wo-enèji mòd-bloke. Lazè sa a emèt limyè lazè ak enèji pik segondè ak enèji mwayèn ki ba, ak yon lajè batman kè nan sèlman 100 femtoseconds ak yon frekans nan 80 a 100 MHz. Lè w ap itilize yon gwo lantiy objektif ouvèti nimerik pou konsantre foton lazè a enpulsyonèl, dansite foton nan konsantre nan lantiy objektif la se pi wo a. De-foton eksitasyon sèlman rive nan konsantre nan lantiy la objektif, kidonk mikwoskòp de-foton pa mande pou yon pinhole konfokal, ki amelyore efikasite deteksyon Fluoresans.
Nan fenomèn fluoresans jeneral la, akòz dansite foton ki ba nan limyè eksitasyon an, yon molekil fliyoresan ka sèlman absòbe yon foton an menm tan epi emèt yon foton fliyoresan atravè yon tranzisyon radyativ. Sa a se yon sèl-foton fluoresans. Pou pwosesis la eksitasyon fluoresans lè l sèvi avèk lazè kòm sous limyè a, de-foton oswa menm milti-foton fenomèn fluoresans ka rive. Nan ka sa a, entansite sous limyè eksitasyon yo itilize a wo, ak dansite foton satisfè egzijans pou molekil fliyoresan yo absòbe de foton an menm tan. Nan pwosesis pou itilize lazè òdinè kòm sous limyè eksitasyon, dansite foton a toujou pa ase pou pwodwi absòpsyon de foton. Anjeneral yo itilize lazè batman femtosecond, ak pouvwa enstantane yo ka rive nan nivo megawatt la. Se poutèt sa, longèdonn fliyoresans de foton pi kout pase longèdonn limyè eksitasyon an, ki ekivalan a efè eksitasyon demi eksitasyon longèdonn ki te pwodwi.
