Detèminasyon kantite mikwo-òganis - metòd konte dirèk nan mikwoskòp la!
Se kwasans popilasyon bakteri manifeste pa yon ogmantasyon nan nimewo selilè oswa yon ogmantasyon nan mas selilè. Metòd yo pou detèmine kantite selil yo gen ladan metòd konte mikwoskòp dirèk, metòd konte koloni plak, metòd rapò lwil fotoelektrik, metòd pwobabilite maksimòm, ak metòd filtraj manbràn. Metòd pou mezire matyè selil yo enkli detèminasyon pwa sèk selilè, detèminasyon sèten eleman selilè tankou kontni nitwojèn, RNA ak ADN, ak detèminasyon metabolit yo. Nan ti bout tan, gen anpil metòd pou mezire kwasans mikwo-òganis, yo chak ak pwòp avantaj ak dezavantaj li yo, epi yo ta dwe chwazi selon sitiyasyon an espesifik. Eksperyans sa a sitou prezante metòd konte dirèk mikwoskòp ki souvan itilize nan pwodiksyon ak rechèch syantifik.
1. Objektif Kondisyon yo
1. Klarifye prensip konte selil san yo.
2. metrize metòd pou konte mikwo-òganis lè l sèvi avèk yon kontwa selil san.
2. Prensip debaz yo
Mikwoskòp metòd konte dirèk se yon metòd senp, rapid ak entwisyon pou konte dirèkteman yon ti kantite sispansyon echantiyon an yo dwe teste sou yon glise espesyal vè ak yon sèten zòn ak volim (ke yo rele tou yon kontwa bakteri). Metòd. Kounye a, kontwa bakteri yo souvan itilize nan kay ak aletranje yo se: tablo konte selil san, kontwa bakteri Peteroff-Hauser ak kontwa bakteri Hawksley, elatriye Yo ka itilize pou konte ledven, bakteri, espò mwazi ak lòt sispansyon, ak prensip debaz la se menm bagay la. Dènye de kalite kontwa bakteri yo gen yon volim total de 0.02mm3 apre yo fin kouvri ak yon vè kouvèti, ak distans ki genyen ant glas kouvèti a ak glise a se sèlman 0.02mm, kidonk lwil oliv la. lantiy objektif imèsyon ka itilize pou obsève ak obsève ti selil tankou bakteri. konte. Anplis de sa nan bakteriomètr sa yo, gen tou yon metòd estimasyon pou rapò a nan zòn nan fwoti a nan zòn nan nan jaden an vizyèl obsève dirèkteman anba mikwoskòp la, ki se jeneralman yo itilize pou egzamen bakteriolojik nan lèt. Avantaj ki genyen nan metòd konte dirèk mikwoskòp yo se entwisyon, vit ak fasil yo opere. Sepandan, dezavantaj nan metòd sa a se ke rezilta a mezire se nòmalman sòm total la nan selil mouri ak vivan. Kounye a, gen kèk metòd pou simonte enpèfeksyon sa a, tankou konbinezon bakteri solid tach mikrochamber kilti (tan kout) ak adisyon nan inibitè divizyon selilè reyalize bi pou yo konte sèlman bakteri solid.
Nan eksperyans sa a, yo te itilize yon emositomèt kòm yon egzanp pou konte mikwoskopik dirèk. Pou itilize de lòt kalite kontè bakteri, tanpri al gade enstriksyon yo nan chak manifakti. Konte dirèkteman anba mikwoskòp ak yon emositomèt se yon metòd souvan itilize pou konte mikwo-òganis. Plak la konte se yon glise espesyal vè, sou ki twa platfòm yo fòme pa kat fant; se platfòm la pi laj nan mitan an divize an de mwatye pa yon plas kout transverse, epi gen yon griy sou chak bò nan platfòm la. Chak kadriyaj divize an nèf kare gwo, ak gwo kare ki nan mitan an se sal konte a. Estrikti plak konte selil san an montre nan Figi l {{{{10}}}}. Echèl la nan chanm nan konte jeneralman gen de espesifikasyon, youn se yon gwo kare divize an 25 kare mitan, ak chak kare mitan divize an 16 ti kare (Figi 15-2); lòt la se yon gwo kare. Kare a divize an 16 kare mitan, epi chak kare mitan divize an 25 ti kare, men pa gen pwoblèm ki kalite tablo konte li ye, gen 400 ti kare nan chak gwo kare. Longè bò chak gwo kare se 1mm, ak zòn nan chak gwo kare se 1mm2. Apre kouvri ak yon vè kouvèti, wotè ki genyen ant glas kouvèti a ak vè glise a se 0.1mm, kidonk volim chanm konte a se 0.lmm3 (yon milyèm nan yon mililit). Figi 15-1 Estrikti tablo konte selil san an (1) Figi 15-2 Estrikti tablo konte selil san an (2) A. Vide devan; B. View seksyon longitudinal; Kadriyaj la elaji, kare a gwo nan mitan an se chanm nan konte 1. Selil san Plak konte; 2. Kouvri vè; 3. Lè konte nan chanm konte a, anjeneral konte kantite total bakteri nan senk kare, Lè sa a, kalkile mwayèn chak kare, epi miltipliye pa 25 oswa 16 pou jwenn Kantite total bakteri nan yon kare gwo Lè sa a, konvèti nan la. kantite total bakteri nan 1ml solisyon bakteri. Se pou kantite total bakteri nan senk kare yo se A, epi rapò dilusyon solisyon bakteri an dwe B. Si se yon plak konte ki gen 25 kare, kantite total bakteri nan 1 mL solisyon bakteri {{26} } A/5×25×104× B=50000A·B(moso) Menm jan an tou, si se yon plak konte ak 16 kare mwayen, kantite total bakteri nan 1mL solisyon bakteri=A/ 5×16×104×B=32000A·B (moso)
3. Ekipman
1. Bakteri
Saccharomyces cerevisiae
2. Enstriman oswa lòt istansil
Emocytometer, mikwoskòp, lam kouvèti, gout kapilè esteril.
4. Etap operasyon yo
1. Preparasyon sispansyon bakteri
Saccharomyces cerevisiae te prepare nan yon sispansyon bakteri nan konsantrasyon apwopriye ak saline esteril fizyolojik.
2. Sal konte mikwoskòp
Anvan ou ajoute echantiyon, mikwoskopik enspekte chanm konte plak konte a. Si gen pousyè tè, li bezwen netwaye epi seche anvan konte.
3. Ajoute echantiyon
Kouvri emositomèt pwòp epi sèk la ak yon kouvèti, epi sèvi ak yon gout kapilè esteril pou lage yon ti gout nan sispansyon Saccharomyces cerevisiae ki souke soti nan kwen an nan kouvèti a, epi kite solisyon an bakteri otomatikman deplase sou espas sa a pa osmoz kapilè. K ap antre nan sal konte a, sal konte jeneral la ka ranpli ak likid bakteri. Lè pran echantiyon, premyèman souke solisyon bakteri an; lè w ajoute echantiyon, pa gen okenn bul lè yo ta dwe pwodwi nan chanm nan konte.
4. mikwoskòp konte
Apre w fin ajoute echantiyon an, rete kanpe pou 5 minit, Lè sa a, mete emocytometer la sou etap mikwoskòp la, premye jwenn kote chanm konte a ak yon mikwoskòp ki ba-pouvwa, ak Lè sa a, chanje nan yon mikwoskòp gwo pouvwa pou konte. Ajiste entansite limyè mikwoskòp la kòmsadwa. Pou mikwoskòp ki sèvi ak miwa pou ekleraj, peye atansyon pou pa devye soti nan yon bò nan limyè a, otreman li pa pral fasil yo wè liy yo kare nan chanm nan konte byen klè nan jaden an nan vizyon, oswa sèlman liy vètikal oswa liy orizontal pral dwe wè. Si yo jwenn solisyon bakteri an twò konsantre oswa twò dilye anvan konte, li nesesè pou reyajiste dilution la anvan konte. Anjeneral, dilution echantiyon an mande apeprè 5 a 10 bakteri nan chak ti selil. Chak chanm konte chwazi 5 selil mitan (si ou vle 4 kwen ak yon sèl selil mitan nan sant la) pou konte. Selil yo ki sitiye sou liy kadriyaj la jeneralman konte sèlman sou liy anwo ak dwat yo. Nan ka a nan boujònman ledven, lè gwosè a nan boujon an rive nan mwatye nan selil manman an, li se konte kòm de selil bakteri. Pou konte yon echantiyon, kalkile kontni bakteri echantiyon an lè w kalkile valè mwayèn nan de chanm konte yo.
5. Lave konte selil san an
Apre w fin itilize, rense tablo pou konte selil san an ak dlo nan tiyo a, pa fwote ak objè difisil, epi sèk li poukont ou oswa avèk yon seche cheve apre w fin lave. Egzamen mikwoskopik pou obsève si gen bakteri rezidyèl oswa lòt sediman nan chak ti selil. Si li pa pwòp, li dwe lave repete jiskaske li pwòp.
