Ki objektif yon mikwoskòp konfokal?
1. Apre efò yo ak amelyorasyon nan gwo predesesè nou yo, mikwoskòp optik la te rive nan pwen nan pèfeksyon. An reyalite, mikwoskòp òdinè ka bay nou bèl imaj mikwoskopik tou senpleman ak byen vit. Sepandan, yon evènman ki te pote inovasyon revolisyonè nan mond mikwoskòp prèske pafè sa a te rive, ki se envansyon nan "mikwoskòp konfokal optik lazè". Karakteristik nan nouvo kalite mikwoskòp sa a se ke li adopte yon sistèm optik ki sèlman ekstrè enfòmasyon imaj sou sifas kote konsantre a konsantre, epi retabli enfòmasyon yo jwenn nan memwa imaj la pandan y ap chanje konsantre, pou enfòmasyon konplè 3D yo ka jwenn. Yon imaj strik nan entèlijans. Avèk metòd sa a, li posib fasilman jwenn enfòmasyon sou fòm nan sifas ki pa ka konfime ak yon mikwoskòp nòmal. Anplis de sa, pou mikwoskòp optik òdinè, "ogmante rezolisyon" ak "pwofondè pwofondè nan konsantre" se kondisyon kontradiktwa, espesyalman nan gwo agrandisman, kontradiksyon sa a pi enpòtan, men an tèm de mikwoskòp konfokal, pwoblèm sa a fasil rezoud.
2. Avantaj nan sistèm optik konfokal
Dyagram chema mikwoskòp konfokal lazè
Sistèm optik konfokal la fè limyè pwen sou echantiyon an, epi limyè reflete a resevwa tou pa reseptè pwen an. Lè echantiyon an mete nan pozisyon konsantre, prèske tout limyè reflete a ka rive nan fotoreseptè a, epi lè echantiyon an pa konsantre, limyè reflete a pa ka rive nan fotoreseptè a. Sa vle di, nan sistèm optik konfokal la, sèlman imaj la ki kowenside ak pwen fokal la pral pwodiksyon, ak tach limyè yo ak limyè gaye initil yo pral pwoteje.
3. Poukisa sèvi ak lazè?
Nan sistèm optik konfokal la, echantiyon an eklere nan yon pwen, epi limyè reflete a resevwa tou pa yon fotoreseptè pwen. Se poutèt sa, yon sous limyè pwen vin nesesè. Lazè yo trè pwen limyè sous. Nan pifò ka yo, sous limyè lazè yo itilize kòm sous limyè pou mikwoskòp konfokal. Anplis de sa, karakteristik sa yo nan monochromaticity, direksyon ak ekselan fòm gwo bout bwa nan lazè yo tou rezon enpòtan pou adopsyon lajè li yo.
4. Obsèvasyon an tan reyèl ki baze sou optik gwo vitès vin posib
Pou optik lazè, inite acoustic-aktive optik devyasyon (Acoustic Optical Deflector, eleman AO) yo itilize nan direksyon orizontal, ak Servo Galvano-glas la itilize nan direksyon vètikal. Depi inite devyasyon acousto-optik la pa gen okenn pati vibrasyon mekanik, li ka fè optik gwo vitès ak obsèvasyon an tan reyèl sou ekran pou kontwole a posib. D 'sa a gwo vitès se yon atik trè enpòtan ki afekte dirèkteman vitès la nan konsantre ak rekipere pozisyon.
5. Relasyon ki genyen ant pozisyon konsantre ak klète
Nan sistèm optik konfokal la, klète echantiyon an se maksimòm lè echantiyon an kòrèkteman mete nan pozisyon fokal la, ak klète li yo ap diminye sevè anvan ak apre li (liy solid nan Figi 4). Selektif sansib nan plan fokal la se tou prensip detèminasyon direksyon wotè mikwoskòp konfokal ak ekspansyon pwofondè fokal. Kontrèman, mikwoskòp optik òdinè pa gen chanjman siyifikatif klète anvan ak apre pozisyon konsantre an.
6. Segondè kontras, segondè rezolisyon
Nan mikwoskòp optik òdinè, akòz entèferans nan limyè a reflete nan pati nan konsantre, li sipèpoze ak pati nan imaj konsantre, sa ki lakòz yon diminisyon nan kontras imaj la. Nan lòt men an, nan sistèm optik konfokal la, limyè a gaye deyò pwen fokal la ak limyè a gaye andedan lantiy la objektif yo prèske konplètman retire, pou yo ka jwenn yon imaj ki gen kontras trè wo. Anplis de sa, paske limyè a pase nan lantiy objektif la de fwa, imaj pwen an file an premye, ki tou amelyore pouvwa a rezoud nan mikwoskòp la.
7. Fonksyon lokalizasyon optik
Nan sistèm optik konfokal la, limyè a reflete lòt pase pwen an koyensidans ak pwen fokal la pwoteje pa micropore la. Se poutèt sa, lè obsève yon echantiyon ki genyen twa dimansyon, se yon imaj ki fòme kòm si echantiyon an koupe ak plan fokal la (Figi 5). Efè sa a ke yo rekonèt kòm lokalizasyon optik e li se youn nan espesyalite sistèm optik konfokal yo.
8. Konsantre fonksyon memwa mobil
Sa yo rele limyè reflete deyò pwen fokal la pwoteje pa micropores yo. Nan lòt men an, li ka konsidere ke tout pwen sou imaj la ki te fòme pa sistèm nan optik konfokal kowenside ak pwen an fokal. Se poutèt sa, si echantiyon ki genyen twa dimansyon deplase sou aks Z la (aks optik), imaj yo akimile ak estoke nan memwa a, epi finalman imaj la ki te fòme pa echantiyon an antye ak pwen fokal la pral jwenn. Fonksyon an nan enfiniman apwofondi pwofondè nan konsantre nan fason sa a yo rele fonksyon an nan memwa mobil.
9. Fonksyon mezi sifas fòm
An tèm de konsantre chanjman fonksyon, fòm sifas echantiyon an ka mezire nan yon fason ki pa kontak lè yo ajoute yon sikwi anrejistreman wotè sifas yo. Ki baze sou fonksyon sa a, li posib pou anrejistre kowòdone Z-aks ki fòme pa valè maksimòm luminans nan chak pixel, epi ki baze sou enfòmasyon sa a, yo ka jwenn enfòmasyon ki gen rapò ak fòm sifas echantiyon an.
10. wo-presizyon mikwo-gwosè fonksyon mezi
Inite limyè-resevwa a adopte yon 1-dimansyon CCD D 'Capteur, kidonk li pa afekte pa enklinezon an optik nan aparèy optik la, se konsa ke mezi-wo presizyon ka ranpli. Anplis de sa, akòz itilize nan fonksyon an memwa chanjman konsantre ak pwofondè konsantre reglabl (apwofondi), erè nan mezi ki te koze pa chanjman konsantre ka elimine.
11. Analiz imaj ki genyen twa dimansyon
Sèvi ak fonksyon mezi sifas fòm, ou ka fasilman kreye yon imaj ki genyen twa dimansyon nan sifas echantiyon an. Se pa sèlman sa, men tou, ka fè yon varyete analiz tankou: mezi brutality sifas, zòn, volim, zòn sifas, sikilè, reyon, longè maksimòm, perimèt, sant gravite, imaj tomografik, transfòmasyon FFT, mezi lajè liy, elatriye. .
Mikwoskòp optik konfokal lazè ka itilize pa sèlman pou obsève mòfoloji selilè, men tou pou analiz quantitative konpozan biochimik intraselilè, estatistik dansite optik ak mezi mòfoloji selilè.
