Kondisyon pou preparasyon echantiyon pou mikwoskopi fluoresans
Kondisyon pou Preparasyon Espesimèn pou Mikwoskopi Fluoresan
(1) Glise vè
Epesè vè glise a ta dwe ant 0.8-L2mm. Yon glise ki twò epè pral absòbe plis limyè sou yon bò epi li pa ka konsantre limyè eksitasyon an sou echantiyon an nan lòt men an. Glisad yo dwe lis, inifòm nan epesè, ak gratis nan otofluoresans evidan. Pafwa glisad kwatz yo itilize.
(2) Kouvri vè
Epesè vè kouvèti a se apeprè 0.17mm, lis. Yo nan lòd yo ranfòse limyè eksitasyon an, yo ka itilize yon vè kouvèti entèferans tou, ki se yon glas kouvèti espesyal kouvwi ak plizyè kouch sibstans (tankou fliyò mayezyòm) ki gen diferan efè entèferans sou limyè nan longèdonn diferan, sa ki ka fè a. fliyoresans lis. Limyè eksitasyon pase nan, ak limyè eksitasyon an reflete, ak limyè eksitasyon reflete sa a ka eksite echantiyon an.
(3) Espesimèn
Tisi tranch oswa lòt espesimèn pa ta dwe twò epè. Si epesè a twò epè, pi fò nan limyè eksitasyon an pral boule nan pati ki pi ba nan echantiyon an, pandan y ap pati anwo a dirèkteman obsève pa lantiy la objektif pa ka konplètman eksite. Anplis de sa, fluoresans ki te koze pa sipèpoze selil oswa enpurte, background tach ki pa espesifik afekte jijman an.
(4) lwil oliv glas
Anjeneral, lè w ap obsève espesimèn ak mikwoskòp fliyoresan jaden nwa ak mikwoskòp imèsyon lwil oliv, yo dwe itilize lwil oliv imèsyon. Li pi bon yo sèvi ak lwil espesyal ki pa fliyoresan imèsyon. Glycerin kapab tou itilize olye de sa, ak parafine likid ka itilize tou, men endèks refraktif la ba, ki gen yon ti enpak sou bon jan kalite imaj.
Konprann Kib Limyè Mikwoskopi Fluoresan
Fliyoresans se limyè ke elektwon nan yon sibstans absòbe enèji limyè ki soti nan yon eta ki ba-enèji nan yon eta ki gen gwo enèji, ak Lè sa a, lage limyè lè li retounen nan yon eta ki ba-enèji. Li se limyè ki pa-tanperati radiation-luminesans. Sa vle di: sibstans la absòbe limyè onn kout, antre nan yon eta eksite, epi emèt limyè onn long.
Kit se otofluoresan sibstans la, lank fliyoresan oswa pwoteyin fliyoresan ki eksprime pa fizyon, li bezwen eksite pa yon longèdonn espesifik nan limyè (Eksitasyon). Apre elektwon yo imigre epi pèdi enèji, yo emèt limyè nan yon longèdonn long espesifik (emisyon). , ki ka kolekte pa sistèm deteksyon an pou reyalize fonksyon pou idantifye fluoresans espesifik.
Ki sa ki yon kib limyè fliyoresan?
Nan obsèvasyon mikwoskòp fluoresans ak D, limyè eksitasyon nan longèdonn espesifik ak korespondan limyè emisyon longèdonn ki koresponn lan se kib limyè fliyoresan yo bay, se konsa ke siyal la fluoresans ka kolekte pa je a toutouni, ekran ekspozisyon oswa kamera. Se poutèt sa, kib la limyè fliyoresan detèmine sa ki ka detekte Aparèy kle nan siyal la fliyoresans, karakteristik li yo enkli EX: paramèt eksitasyon longèdonn filtre, EM: paramèt emisyon longèdonn filtre ak DM: paramèt glas dikotomik. Pran kib limyè DAPI nan mikwoskòp fluoresans entegre Revolve kòm yon egzanp, EX: 385/30, EM: 450/50, DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >425nm limyè ka transmèt nan EM la; Filtè emisyon EM yo itilize pou separe fliyoresans ki emèt pa fluorophore a soti nan lòt background optik eleman pou separe limyè. Filtè emisyon transmèt limyè nan longèdonn fliyoresans nan glas dichroic la pandan y ap bloke tout lòt limyè ki koule soti nan sous limyè eksitasyon an (reflete nan echantiyon an oswa optik). Longèdonn limyè ki emèt la pi gran pase EM yo dwe obsève, se sa ki, se sèlman limyè ki nan seri a nan 450±25nm antre nan sistèm deteksyon an. Bon seleksyon EX, filtè EM, ak dikotomi DM ka ede chèchè yo reyalize pi gwo rapò siyal-a-bri (S/N).
