Prensip Mikwoskopi Lazè Konfokal (LSCM)
Yon mikwoskòp konfokal lazè sèvi ak yon pinhole ekleraj mete dèyè sous limyè a ak yon pinhole deteksyon mete devan detektè a pou reyalize pwen lumières ak deteksyon pwen. Limyè ki soti nan sous limyè a konsantre sou yon pwen nan plan fokal echantiyon an pa limyè ki emèt nan pinhole ekleraj la, epi fliyoresans ki emèt soti nan pwen sa a imajine nan pinhole deteksyon an, epi nenpòt limyè emèt deyò pwen sa a bloke pa la. deteksyon pinhole. Pinhole ekleraj la ak pinhole deteksyon an konjige pou pwen an eklere oswa detekte, se konsa ke pwen an detekte se pwen an konfokal ak avyon an kote pwen an detekte sitiye se plan an konfokal. Òdinatè a montre pwen yo detekte sou ekran òdinatè a nan fòm yon pwen imaj. Yo nan lòd yo pwodwi yon imaj konplè, yon sistèm optik nan chemen an optik analiz sou plan fokal echantiyon an, konsa pwodwi yon imaj konfokal konplè. Osi lontan ke etap konpayi asirans lan deplase monte ak desann sou aks Z la, yon nouvo nivo echantiyon an deplase nan plan konfokal la, epi nouvo nivo echantiyon an imajine sou monitè a, kòm aks Z la ap kontinye. deplase, siksesif imaj koupe limyè nan diferan nivo echantiyon an yo jwenn.
Mikwoskòp optik tradisyonèl la sèvi ak yon sous limyè jaden, imaj chak pwen sou echantiyon an pral entèfere ak difraksyon oswa gaye limyè ki soti nan pwen vwazen yo; lazè eskanè konfokal mikwoskòp sèvi ak yon reyon lazè nan pinhole a eklere yo fòme yon sous limyè pwen sou echantiyon an analize nan chak pwen nan plan an fokal entèn, echantiyon an sou pwen an iradyasyon, D la nan pinhole deteksyon an, pa deteksyon an nan pinhole. apre pwen an nan tib miltiplikasyon limyè (PMT) oswa aparèy frèt electrocoupled (cCCD) Resevwa pwen-pa-pwen oswa liy-pa-liy, yon imaj fliyoresan rapidman fòme sou ekran an pou kontwole òdinatè. Ekleraj pinhole ak deteksyon pinhole relatif nan avyon an fokal nan lantiy la objektif se konjige, pwen an sou avyon an fokal nan menm tan an konsantre sou pinhole a ekleraj ak pinhole emisyon, pwen an deyò avyon an fokal pa pral nan deteksyon an nan la. pinhole nan D la, se konsa ke imaj la konfokal jwenn se optik koup transvèsal echantiyon an, simonte enpèfeksyon yo nan imaj la mikwoskòp òdinè flou.
Soti nan prensip debaz la, mikwoskòp konfokal lazè se yon mikwoskòp optik modèn, li se mikwoskòp limyè òdinè soti nan teknoloji a fè amelyorasyon sa yo.
1. Sèvi ak lazè kòm sous limyè paske monochromaticity lazè a trè bon, longèdonn gwo bout bwa sous limyè a se menm bagay la, fondamantalman elimine aberasyon kromatik la.
2. Itilize nan teknoloji konfokal nan plan fokal lantiy objektif la mete nan mitan an ak yon ti twou nan deflteur a, avyon an fokal deyò bloke limyè ki pèdi a, elimine aberasyon esferik la; ak plis elimine aberasyon nan kromatik.
3. Lazè mikwoskòp konfokal lè l sèvi avèk teknoloji optik pwen pou dekonpoze echantiyon an nan espas ki genyen de dimansyon oswa twa dimansyon nan pwen inonbrabl, ak yon gwo reyon lazè (sous limyè pwen) pwen pa pwen, liy pa liy optik imaj, ak Lè sa a, atravè. konbinezon mikwo-odinatè yon plan antye oswa imaj ki genyen twa dimansyon. Mikwoskòp limyè tradisyonèl la se yon sous limyè jaden anba imaj la yon sèl fwa, espesimèn sou chak pwen nan imaj la pral adjasan a pwen an nan limyè difrakte ak entèferans limyè gaye. Klè ak presizyon de imaj sa yo pa ka konpare.
4. Akizisyon ak pwosesis siyal optik ak yon òdinatè ak anplifikasyon siyal yo ak yon tib fotomultiplikatè.
Nan mikwoskòp konfokal lazè a, òdinatè a ranplase je imen an oswa kamera pou obsèvasyon ak anrejistreman videyo, ak imaj yo jwenn yo nimerik epi yo ka trete nan òdinatè a amelyore klè nan imaj yo ankò. Anplis, itilize nan tib fotomultiplikatè ka anplifye siyal trè fèb, anpil amelyore sansiblite a. Kòm yon rezilta nan itilizasyon konbine nan teknoloji ki anwo yo, li ka di ke LSCM a se mikwoskòp ki pi avanse nan mond lan. Li ka di ke LSCM se konbinezon an nan teknoloji pwodiksyon mikwoskòp, teknoloji foto-elektrik, teknoloji òdinatè **, se pwodwi a inevitab nan devlopman nan teknoloji modèn.
