Prensip ak Aplikasyon nan Mikwoskopi Fluoresan
(1) Prensip ak karakteristik estriktirèl mikwoskòp fliyoresan an: mikwoskòp fliyoresan an sèvi ak yon sous limyè pwen ki gen gwo efikasite lumineux pou emèt limyè nan yon longèdonn sèten (tankou limyè iltravyolèt 3650 nan oswa koulè wouj violèt limyè ble 4200 pous) atravè sistèm filtè a. kòm limyè eksitasyon an eksite echantiyon an. Apre sibstans fliyoresan anndan an emèt fliyoresans divès koulè, li obsève atravè agrandisman lantiy objektif la ak oculaire. Nan fason sa a, anba yon background kontras fò, menm si fliyoresans la trè fèb, li fasil yo idantifye epi li gen gwo sansiblite. Li se sitou itilize pou rechèch la nan estrikti selil ak fonksyon ak konpozisyon chimik. Estrikti debaz yon mikwoskòp fliyoresan konpoze de yon mikwoskòp optik òdinè plis kèk Pwodwi pou Telefòn (tankou yon sous limyè fliyoresan, yon filtè eksitasyon, yon splitter gwo bout bwa de koulè ak yon filtè bloke, elatriye). Sous limyè fliyoresan - jeneralman itilize ultra-wo presyon mèki lanp (50-200W), ki ka emèt limyè nan longèdonn divès kalite, men chak sibstans fliyoresan gen yon longèdonn eksitasyon ki pwodui fliyoresans ki pi fò, kidonk li nesesè ajoute yon filtè eksitasyon (Anjeneral, gen filtè eksitasyon iltravyolèt, koulè wouj violèt, ble ak vèt), ki sèlman pèmèt limyè eksitasyon nan yon longèdonn sèten pase nan ak iradyasyon echantiyon an, pandan y ap absòbe lòt limyè. Apre chak sibstans ki iradyasyon pa limyè eksitasyon, li emèt fliyoresans vizib ak yon longèdonn ki pi long pase longèdonn iradyasyon an nan yon tan trè kout. Fliyoresans espesifik e jeneralman pi fèb pase limyè eksitasyon. Yo nan lòd yo obsève fliyoresans espesifik, yon filtè bloke (oswa siprime) oblije dèyè lantiy objektif la. Li gen de fonksyon: youn se absòbe ak bloke limyè eksitasyon an soti nan k ap antre nan oculaire a, se konsa yo pa deranje fluoresans la ak domaje je yo; lòt la se chwazi epi kite fliyoresan espesifik la pase, ki montre yon koulè fliyoresan espesifik. De filtè yo dwe itilize ansanm.
Gen de kalite mikwoskòp fliyoresan an tèm de chemen optik yo:
1. Mikwoskòp fliyoresan transmisyon: sous limyè eksitasyon an eksite fliyoresan atravè materyèl echantiyon an atravè lantiy kondansasyon an. Yon pèseptè jaden nwa yo souvan itilize, epi yo ka itilize yon pèseptè òdinè tou pou ajiste glas la pou limyè eksitasyon an transmèt ak iyore nan echantiyon an. Sa a se yon mikwoskòp fliyoresan ansyen alamòd. Avantaj la se ke fliyoresans la fò nan agrandisman ki ba, ak dezavantaj la se ke fliyoresans la diminye ak ogmantasyon nan agrandisman. Se poutèt sa, li pi bon pou obsève pi gwo materyèl echantiyon.
2. Epi-fluoresan mikwoskòp Sa a se yon nouvo kalite mikwoskòp fluoresans devlope nan tan modèn. Diferans lan se ke limyè a eksitasyon tonbe soti nan lantiy la objektif nan sifas la nan echantiyon an, se sa ki, se menm lantiy la objektif yo itilize kòm kondansasyon an lumières ak lantiy la objektif pou kolekte fliyoresans. Yon splitter gwo bout bwa dichroic bezwen ajoute nan chemen limyè a, ki se 45 degre lwen iranyòm limyè a. Limyè eksitasyon an reflete nan lantiy objektif la epi kolekte sou echantiyon an. Fliyoresans ki te pwodwi pa echantiyon an ak limyè eksitasyon an reflete pa sifas lantiy lantiy objektif la ak sifas glas kouvèti a antre nan lantiy objektif la an menm tan, epi retounen nan splitter gwo bout bwa de-koulè pou fè limyè eksitasyon Separe de fluoresans. , limyè eksitasyon rezidyèl absòbe pa bloke filtè. Si ou chanje nan yon konbinezon de diferan filtè eksitasyon / splitters gwo bout bwa de koulè / bloke filtè, bezwen diferan pwodwi reyaksyon fliyoresan ka satisfè. Avantaj ki genyen nan sa a kalite mikwoskòp fliyoresan se ke ekleraj la nan jaden an de vi se inifòm, D la se klè, ak pi gwo a agrandisman an, pi fò a fliyoresans la.
(2) Kouman pou itilize mikwoskòp fliyoresan an.
1. Vire sous limyè a, lanp mèki presyon ultra-wo bezwen chofe pou kèk minit pou rive nan pwen ki pi klere.
2. Pou mikwoskòp fluoresans transmisyon an, yo ta dwe enstale filtè eksitasyon ki nesesè ant sous limyè a ak kondansasyon an, epi yo ta dwe enstale filtè bloke ki koresponn lan dèyè lantiy objektif la. Epi-fluorescence mikwoskòp bezwen pou mete a mande eksitasyon filtre/double koulè travès splitter/bloke filtre foure nan emplacements nan chemen limyè a.
3. Obsève ak yon lantiy ki ba-agrandisman, epi ajiste sant sous limyè a dapre aparèy ajisteman diferan kalite mikwoskòp fliyoresan pou li sitiye nan sant la nan plas la ekleraj tout antye.
4. Mete fèy echantiyon an epi obsève apre konsantre. Atansyon yo ta dwe peye pandan itilizasyon: pa obsève dirèkteman ak filtè fen a, pou yo pa lakòz domaj nan je yo; lè w ap obsève echantiyon an ak yon lantiy lwil oliv, yo dwe itilize yon lantiy lwil espesyal san fliyoresans; apre yo fin etenn lanp mèki wo-presyon, li pa ka limen ankò imedyatman, epi li bezwen teste. Li ka rekòmanse apre 5 minit, otreman li pral enstab ak afekte lavi a nan lanp mèki a.
(3) Obsèvasyon Sèvi ak yon filtè limyè ble-vyolèt anba yon mikwoskòp fliyoresan sou platfòm ansèyman an, li ka wè ke selil yo tache ak o.01 pousan acridine zoranj lank fliyoresan, nwayo a ak sitoplasm yo eksite yo pwodwi de koulè diferan nan fliyoresans (nwa) vèt ak zoranj-wouj).
