Entwodiksyon nan mikwoskopi fluoresans
Mikwoskopi fluoresans se iradyasyon objè a tache ak fluorescein ak limyè longèdonn kout, se konsa ke li eksite yo pwodwi fluoresans longèdonn long, ak Lè sa a, obsève. Nan yon mikwoskòp fliyoresan, yo dwe chwazi limyè eksitasyon yon longèdonn espesifik nan limyè ekleraj echantiyon an pou jenere fliyoresans, ak Lè sa a, fluoresans la dwe separe ak limyè melanje limyè eksitasyon an ak fliyoresans pou obsèvasyon. Se poutèt sa, sistèm filtre a jwe yon wòl trè enpòtan nan chwazi yon longèdonn espesifik. Mikwoskòp fliyoresan yo lajman itilize nan byoloji, medikaman ak lòt domèn.
1. Konpozan prensipal yo nan mikwoskòp fluoresans la:
(A) Sous limyè: Sous limyè a gaye limyè nan longèdonn divès kalite (soti nan iltravyolèt nan enfrawouj). la
(B) Filtè eksitasyon sous limyè: atravè limyè a nan yon longèdonn espesifik ki ka lakòz echantiyon an pwodui fliyoresans, pandan y ap bloke limyè ki initil pou fliyoresan eksitan. la
(C) espesimèn fliyoresan: jeneralman tache ak pigman fliyoresan. la
(D) Bloke filtè: bloke limyè eksitasyon an ki pa absòbe echantiyon an epi oaza transmèt fliyoresans la, ak kèk longèdonn yo oaza transmèt nan fliyoresans la.
la
2. Klasifikasyon mikwoskòp fluoresans:
Mikwoskòp fliyoresan yo jeneralman divize an de kalite: transmisyon ak epi-emisyon:
a. Kalite transmisyon: limyè eksitasyon an soti nan pati anba a nan objè a yo dwe enspekte, ak kondansasyon an se yon kondansasyon jaden nwa, se konsa ke limyè a eksitasyon pa antre nan lantiy la objektif, men fluoresans la antre nan lantiy la objektif. Li klere nan agrandisman ki ba, men fè nwa nan agrandisman segondè. Li difisil pou opere nan imèsyon lwil oliv ak santre. Li espesyalman difisil pou detèmine ranje ekleraj la nan agrandisman ki ba, men li ka jwenn yon background nan jaden vizyon trè nwa. Kalite transmisyon an pa itilize pou objè ki pa transparan. la
b. Epi-type: Kalite transmisyon an prèske elimine kounye a. Pifò nan nouvo mikwoskòp fliyoresan yo se epi-type. Sous limyè a soti anwo objè a yo dwe enspekte, epi gen yon splitter gwo bout bwa nan chemen an optik, kidonk li se apwopriye pou tou de objè transparan ak opak yo dwe enspekte. Depi lantiy objektif la aji kòm yon lantiy kondansateur, li pa sèlman fasil pou opere, men tou, li ka reyalize limyè inifòm nan tout jaden an de vi soti nan agrandisman ki ba ak gwo agrandisman. la
la
3. Prekosyon pou Fluoroskopi
a. Alontèm iradyasyon nan limyè eksitasyon pral lakòz fliyoresans atténuation ak trempe, kidonk diminye tan an obsèvasyon otank posib, epi sèvi ak yon deflektè pou kouvri limyè a eksitasyon lè yo pa obsève tanporèman. la
b. Lè w ap obsève ak yon lantiy imèsyon lwil oliv, sèvi ak "lwil ki pa fliyoresan". la
c. Fluoresans se prèske toujou fèb epi yo ta dwe te pote soti nan yon chanm nwa. la
d. Li pi bon pou enstale yon estabilizasyon vòltaj nan ekipman pou pouvwa a, otreman vòltaj la enstab pa pral sèlman diminye lavi a nan lanp lan mèki, men tou, afekte efè a nan enspeksyon an mikwoskòp. la
la
4. Itilizasyon Mikwoskopi Fluoresan
1. Kondisyon pou preparasyon pou echantiyon mikwoskòp fluoresans
a. Glise vè
Epesè glise vè a ta dwe ant 0.8 ak 1.2mm. Yon glise ki twò epè pral absòbe plis limyè sou yon bò, epi sou lòt men an, limyè eksitasyon an pa ka konsantre sou echantiyon an. Glisad yo dwe lis, inifòm nan epesè, ak gratis nan otofluoresans evidan. Pafwa glisad vè kwatz yo itilize. la
b. Kouvri vè
Epesè vè kouvèti a se apeprè 0.17mm, lis. Yo nan lòd yo ranfòse limyè eksitasyon an, yo ka itilize yon vè kouvèti sèk tou, ki se yon glas kouvèti espesyal kouvwi ak plizyè kouch sibstans (tankou fliyò mayezyòm) ki gen diferan efè entèferans sou limyè nan longèdonn diferan, sa ki ka fè a. fliyoresans ale san pwoblèm. Limyè eksitasyon pase nan, ak limyè eksitasyon reflete eksite echantiyon an. la
c. Espesimèn
Tisi tranch oswa lòt espesimèn pa ta dwe twò epè. Si li twò epè, pi fò nan limyè a eksitasyon yo pral boule nan pati ki pi ba nan echantiyon an, pandan y ap pati siperyè a dirèkteman obsève pa lantiy la objektif pa ka konplètman eksite. Anplis de sa, sipèpoze selil oswa enpurte kouvri moute, ki afekte jijman an. la
d. Mounting ajan
Glycerin se souvan itilize kòm yon ajan aliye, ki pa dwe pa gen okenn otofluoresans, san koulè ak transparan, ak klète nan fliyoresans la pi klere nan pH 8.5-9.5, epi li pa fasil fennen byen vit. Se poutèt sa, yon melanj egal nan gliserin ak 0.5mol/L kabonat tanpon solisyon ak yon pH nan 9.0 a 9.5 souvan itilize kòm yon ajan aliye. la
e. lwil oliv glas
Anjeneral, lwil oliv imèsyon yo dwe itilize lè obsève espesimèn ak mikwoskòp fliyoresan jaden nwa ak objektif imèsyon lwil oliv. Li pi bon pou sèvi ak espesyal lwil oliv glas ki pa fliyoresan, ki ka ranplase tou pa gliserin ki mansyone anwo a, epi yo ka itilize parafine likid tou, men endèks refraktif la ba, ki afekte yon ti kras kalite imaj la.
