Konbyen Ou Konnen Sou Mikwoskopi Fluoresans
Mikwoskòp fliyoresan jeneralman itilize gwo entansite lanp mèki kòm sous limyè eksitasyon. Filtè yo itilize pou filtre limyè vle, kite sèlman gwo entansite, limyè pi ki eksite fluorophore la. Apre limyè monochromatik la irradie echantiyon an atravè lantiy objektif la, echantiyon an pral eksite pou emèt limyè (fluoresans), epi tou de fliyoresans ak limyè eksitasyon an ap retounen sou chemen optik lantiy objektif la. Nan ka sa a, yon glas dichroic oblije filtre limyè eksitasyon an. , kite sèlman fliyoresans nou bezwen wè nan.
Fliyoresans sa a rive nan oculaire a sou chemen limyè a nan mikwoskòp la, ak Lè sa a, antre nan je nou, kote nou ka wè fliyoresans ki emèt pa fluorophore la.
Pre-tcheke ak ajisteman nan mikwoskòp fliyoresan an:
(1) Anvan chak obsèvasyon fliyoresans, li nesesè regilyèman tcheke aliyman filaman an, konsantre chemen optik, dyafram ouvèti, ak anviwònman dyafram jaden aparèy fliyoresans lan.
(2) Kit yo te enstale asanble filtre eksitasyon/emisyon fluoresans lan nan konvètisè a, si wi ou non lantiy objektif mikwoskòp fluoresans la byen configuré, epi retire tach lwil oliv ak pousyè sou lantiy devan lantiy objektif la.
(3) Si obsèvasyon kontras faz limyè transmèt fèt an menm tan, li nesesè pou tcheke konjigezon sant kondansasyon an ak bag kontras faz ki opoze ak lantiy objektif la.
(4) Tcheke si pòtè echantiyon an (glas vè, kouvèti vè ak lòt istansil) kouvri ak likid oswa pousyè, epi si epesè a nan ranje distans kalibre k ap travay nan lantiy objektif la. Echantiyon an tranche pa ta dwe twò epè, de preferans mwens pase oswa egal a 10 μm.
(5) Paske sous ekleraj la gen reyon iltravyolèt, yo mete yon plak pwotèj limyè mawon anlè devan etap la pou anpeche reyon iltravyolèt domaje retin lan.
(6) Enstabilite vòltaj ap diminye lavi sèvis lanp mèki wo-presyon, epi ekipman pou sous limyè a ekipe ak yon estabilize vòltaj.
(7) Pou pwolonje lavi lanp mèki a, li ka etenn 15 minit apre li limen; yon fwa pouvwa fliyoresan lanp mèki a etenn, li bezwen rete tann omwen 10 minit pou rekòmanse vapè mèki a refwadi epi retounen nan eta orijinal la, otreman lavi lanp lan pral afekte.
Obsèvasyon imaj pa mikwoskòp fliyoresan:
(1) Apeprè 5-10 minit apre yo fin limen sous limyè fliyoresan an, entansite limyè eksitasyon an gen tandans pou li estab, epi echantiyon an chaje pou obsèvasyon; yo nan lòd yo anpeche fliyoresans asouvisman echantiyon an ki te koze pa limyè eksitasyon twòp pandan pwosesis la nan konsantre ak kap chèche objè, premye rale soti mikwoskòp fluoresans la Ajiste limyè a eksitasyon nan yon entansite modere ak yon dyafram Ouverture oswa ajoute yon filtè ND, ak deplase etap echantiyon an regilyèman. Apre konfime imaj la glas, ajiste nan eta a fliyoresan pou tire ak anrejistreman.
(2) Ajisteman pou bon jan kalite imaj pòv. Anplis de faktè preparasyon echantiyon, ajisteman ki nesesè yo ka fè yo se:
① Ekskli aparèy limyè-pwoteksyon oswa limyè-limite nan chemen an D 'optik, tankou Pwodwi pou Telefòn DIC, filtè ND, elatriye.
②Reajiste konsantre reseptè a ak gwosè dyafram ouvèti mikwoskòp fluoresans la.
③ Ak anpil atansyon ajiste bag koreksyon diferans kouvèti a nan lantiy objektif mikwoskòp fluoresans la.
Pwen aplikasyon pou Mikwoskopi Fluoresans
Mikwoskopi fliyoresan itilize "aktinik fluoresans" D. Si longèdonn eksitasyon chwazi a se nan rejyon tou pre-iltravyolèt (320-400nm), ki se envizib nan je toutouni, spectre emisyon fliyoresans tou pi kout pase longèdonn mwayèn nan sous limyè òdinè glas limyè. amelyore. Foton ki gen gwo enèji fè kolizyon ak elektwon, sa ki lakòz elektwon yo tranzisyon soti nan eta tè a nan eta a eksite. Elektwon yo nan eta eksite yo trè enstab epi yo pral tonbe tounen nan eta tè a. Nan pwosesis sa a, yon pati nan enèji tèmik yo pral konsome ak nouvo foton yo pral emèt. Nouvo foton an gen yon enèji ki pi ba pase foton orijinal la e se poutèt sa gen yon longèdonn ki pi long. Depi nouvo longèdonn foton an diferan de longèdonn foton limyè ensidan an, de travès limyè ak longèdonn diferan yo separe pa yon sèten metòd pwosesis optik, pou nou sèlman wè nouvo foton ki emèt (siyal fliyoresans), se sa ki, mikwoskòp fluoresans la wè imaj fluoresans.
