Konte dirèk nan mikwo-òganis ak yon mikwoskòp
Prensip eksperimantal
Konte dirèk anba yon mikwoskòp lè l sèvi avèk yon emositomèt se yon metòd konte mikwòb souvan itilize. Avantaj nan metòd sa a se ke li se entwisyon ak vit. Mete sispansyon bakteri ki byen dilye (oswa sispansyon spor) nan chanm konte ant glise a ak glas kouvèti emositomèt la, epi konte anba mikwoskòp la. Depi volim chanm konte a fiks (0.1mm2), li ka konvèti nan kantite total mikwo-òganis pou chak volim inite dapre kantite mikwo-òganis yo obsève anba mikwoskòp la. Paske metòd sa a konte sòm bakteri vivan ak mouri, yo rele l tou metòd konte total bakteri.
Yon emocytometer se nòmalman yon glise an vè espesyal sou ki kat siyon fòme twa platfòm. Platfòm nan mitan an divize an de mwatye pa yon kout Groove orizontal. Yon kadriyaj grave sou platfòm la sou chak bò. Chak kadriyaj divize an nèf gwo kare. Gwo kare ki nan mitan an se sal konte a. Mikwo-òganis yo konte nan chanm konte a. Estrikti tablo konte selil san an montre nan Figi Ⅷ-1.
Echèl la nan sal la konte jeneralman gen de espesifikasyon, youn se ke yon gwo kare divize an 16 kare mitan, ak chak kare mitan divize an 25 ti kare (Figi Ⅷ-2); lòt la se yon gwo kare. Kare a divize an 25 kare mitan, epi chak kare mitan divize an 16 ti kare (Figi Ⅷ-1, C). Men, kèlkeswa kalite tablo konte li ye, kantite ti kare ki nan chak gwo kare se menm, sa vle di 16×25=400 ti kare, jan yo montre nan Figi Ⅷ-2.
Longè bò chak gwo kare se 1 mm, ak sipèfisi chak gwo kare se 1 mm2. Apre glas kouvèti a kouvri, wotè ant glas la glise ak glas kouvèti a se 0.1 mm, kidonk volim chanm konte a se 0.1mm3.
Lè w ap konte, anjeneral konte kantite total bakteri nan senk kadriyaj mitan yo, Lè sa a, jwenn valè mwayèn chak kadriyaj mitan, ak Lè sa a, miltipliye pa 16 oswa 25 pou jwenn kantite total bakteri nan yon gwo kadriyaj, ak Lè sa a, Konvèti nan la. kantite total bakteri nan 1ml solisyon bakteri.
Ekipman laboratwa
Emocytometer, mikwoskòp, kouvèti, kapilè esteril;
Materyèl eksperimantal
Saccharomyces cerevisiae sispansyon
Pwosedi eksperimantal (metòd konte dirèk mikwoskòp)
1. dilution
Byen dilye sispansyon Saccharomyces cerevisiae la. Si solisyon bakteri an pa epè, li pa bezwen dilye.
2. Sal konte mikwoskopik
Anvan ou ajoute echantiyon, fè yon enspeksyon mikwoskopik nan chanm konte plak konte a. Si gen pousyè tè, li bezwen netwaye anvan konte.
3. ajoute echantiyon
Kouvri plak emositomèt ki pwòp epi sèk la ak yon vè kouvèti, epi sèvi ak yon ti gout bouch esteril pou lage yon ti gout nan solisyon Saccharomyces cerevisiae ki dilye ki soti nan kwen glas kouvèti a (pa twòp), pou solisyon bakteri an. se tou pre espas sa a sou espas sa a. Osmoz kapilè antre nan chanm konte a pou kont li, epi chanm konte jeneral la ka ranpli ak likid bakteri. Fè atansyon pou pa gen bul lè.
4. konte mikwoskòp
Apre repoze pou 5 minit, mete emositomètr la sou sèn nan mikwoskòp la, premye sèvi ak yon lantiy pouvwa ki ba pou jwenn kote chanm nan konte, ak Lè sa a, chanje nan yon lantiy gwo pouvwa pou konte. Si li jwenn ke solisyon an bakteri twò epè oswa twò mens anvan konte, li nesesè re-ajiste dilution la anvan konte. Anjeneral, dilution echantiyon an mande apeprè 5-10 bakteri nan chak selil. Chak chanm konte chwazi bakteri yo nan 5 grilles mitan (si ou vle 4 kwen ak grille santral) pou konte. Bakteri yo sou liy kadriyaj la jeneralman konte sèlman sou liy anwo ak dwat yo. Nan ka ledven boujònman, lè gwosè a nan kò a boujon rive nan mwatye nan selil manman an, konte de bakteri. Konte yon echantiyon pou kalkile kontni bakteri echantiyon an apati valè yo konte nan de chanm konte yo.
5. Netwaye Emocytometer la
Apre w fin itilize, rense plak konte selil san an sou tiyo a ak jè dlo, pa lave l ak objè difisil, epi sèk li poukont ou oswa avèk yon seche cheve apre w fin lave. Egzamen mikwoskopik, obsève si gen bakteri rezidyèl oswa lòt sediman nan chak selil. Si li pa pwòp, li dwe lave repete jiskaske li pwòp.
