Konparezon ant mikwoskòp konfokal ak mikwoskòp optik òdinè
Mikwoskòp optik jeneral
Mikwoskòp byolojik jeneral la konsiste de twa pati, sètadi: ① sistèm ekleraj, ki gen ladan sous limyè ak kondansateur; ② Sistèm anplifikasyon optik, ki gen ladann lantiy objektif ak oculaire, se kò prensipal mikwoskòp la. Yo nan lòd yo elimine aberasyon esferik ak aberasyon kromatik, tou de oculaire ak lantiy objektif yo konpoze de gwoup lantiy konplèks; (3) aparèy mekanik, ki itilize pou fikse materyèl ak obsèvasyon pratik.
Si imaj la mikwoskòp klè oswa ou pa depann pa sèlman sou agrandisman an, men tou, sou rezolisyon an nan mikwoskòp la. Rezolisyon refere a kapasite mikwoskòp la (oswa plas kote je imen yo 25cm lwen sib la) pou distenge ti entèval zui objè a. Rezolisyon an depann sou longèdonn limyè a, rapò ouvèti a ak endèks refraktif mwayen an, ki eksprime fòmil la:
R=0.61λ /N．A． N．A．＝ｎsin /2
Ki kote: n= endèks refraktif mwayen;=ang glas (ang ouvèti echantiyon an ak ouvèti lantiy la), ak NA= ouvèti nimerik. Ang glas la toujou mwens pase 180? Se poutèt sa, valè zui nan sina/2 dwe mwens pase 1.
Endèks refraktif nan glas la itilize pou fè lantiy optik se 1.65 ~ 1.78, ak endèks refraktif nan mwayen yo itilize a se pi pre sa ki nan glas la, pi bon an. Pou lantiy objektif sèk la, mwayen an se lè, ak rapò ouvèti a jeneralman 0.05 ~ 0.95; Lantiy lwil oliv la sèvi ak asfalt santi bon kòm mwayen an, ak pousantaj ouvèti lantiy la ka fèmen nan 1.5.
Longèdonn limyè òdinè se 400 ~ 700nm, kidonk rezolisyon mikwoskòp la se pa mwens pase 0.2μm, ak rezolisyon je imen an se 0.2mm, kidonk gwo agrandisman zui ki fèt pa mikwoskòp jeneral se nòmalman 1000X x.
Poukisa ou bezwen yon mikwoskòp konfokal?
1. Mikwoskòp optik la te pèfeksyone atravè efò ak amelyorasyon gwo predesesè nou yo. An reyalite, mikwoskòp òdinè ka bay nou bèl imaj mikwoskopik tou senpleman ak byen vit. Sepandan, yon evènman ki te pote inovasyon revolisyonè nan mond mikwoskòp prèske pafè sa a te rive, ki se envansyon "lazè optik mikwoskòp konfokal". Nouvo mikwoskòp sa a karakterize pa adopte yon sistèm optik ki sèlman ekstrè enfòmasyon imaj la sou avyon an kote konsantre a konsantre, ak restore enfòmasyon yo jwenn nan memwa imaj la pandan y ap chanje konsantre a, se konsa ke yon imaj rete vivan ak enfòmasyon konplè ki genyen twa dimansyon. ka jwenn. Pa metòd sa a, enfòmasyon sou fòm nan sifas ki pa ka konfime pa mikwoskòp òdinè ka tou senpleman jwenn. Anplis de sa, pou mikwoskòp optik òdinè, "amelyore rezolisyon an" ak "apwofondi pwofondè nan konsantre" se kondisyon kontradiktwa, espesyalman nan gwo agrandisman, men pou mikwoskòp konfokal, pwoblèm sa a rezoud.
2. Avantaj nan sistèm optik konfokal
Sistèm optik konfokal eklere pwen echantiyon an, epi limyè reflete a tou resevwa pa reseptè pwen yo. Lè echantiyon an mete nan pozisyon konsantre a, prèske tout limyè reflete a ka rive nan fotoreseptè a, men lè echantiyon an devye nan konsantre, limyè a reflete pa ka rive nan fotoreseptè a. Sa vle di, nan sistèm optik konfokal la, sèlman imaj la ki kowenside ak konsantre a pral pwodiksyon, ak facula a ak limyè gaye initil yo pral pwoteje.
3. Poukisa sèvi ak yon lazè?
Nan sistèm optik konfokal la, echantiyon an eklere epi limyè reflete a resevwa tou pa yon fotoreseptè pwen. Se poutèt sa, sous limyè pwen vin nesesè. Lazè fè pati yon sous limyè trè pwen. Nan pifò ka yo, sous limyè mikwoskòp konfokal adopte sous limyè lazè. Anplis de sa, karakteristik sa yo nan lazè, tankou monochromaticity, dirèktivite ak fòm gwo bout bwa ekselan, yo tou rezon enpòtan pou itilizasyon lajè li yo.
4. Obsèvasyon an tan reyèl ki baze sou optik gwo vitès vin posib.
Nan optik lazè a, yo itilize Acoustic Optical Deflector (AO premye eleman) nan direksyon orizontal ak Servo Galvano-glas la itilize nan direksyon vètikal. Paske pa gen okenn pati Vibration mekanik nan inite acoustic defleksyon optik la, li ka eskane nan gwo vitès, epi li posib yo obsève an tan reyèl sou ekran an siveyans. Gwo vitès kamera sa a se yon pwojè trè enpòtan ki afekte dirèkteman vitès konsantre ak rekiperasyon pozisyon.
5. Relasyon ant pozisyon konsantre ak klète
Nan sistèm optik konfokal la, lè echantiyon an kòrèkteman mete nan pozisyon konsantre, klète a gwo, epi anvan ak apre li, klète li yo pral tonbe sevè (liy solid nan Figi 4). Sa a selektivite sansib nan avyon an fokal se tou prensip la nan mezire direksyon wotè nan mikwoskòp konfokal ak elaji pwofondè nan fokal. Kontrèman, mikwoskòp optik òdinè a pa gen chanjman klète evidan anvan ak apre pozisyon konsantre (liy pwentiye nan Figi 4).
6. Segondè kontras ak rezolisyon segondè
An jeneral mikwoskòp optik, limyè a reflete devye nan konsantre a pral entèfere, epi li pral sipèpoze ak pati nan imaj konsantre, kidonk diminye kontras nan imaj. Kontrèman, nan sistèm optik konfokal la, limyè ki gaye deyò konsantrasyon an ak limyè ki gaye andedan lantiy objektif la prèske konplètman retire, kidonk yo ka jwenn yon imaj ki gen kontras trè wo. Anplis de sa, paske limyè a pase nan lantiy objektif la de fwa, imaj pwen an file an premye, epi rezolisyon mikwoskòp la amelyore tou.
7. Fonksyon lokalizasyon optik
Nan sistèm optik konfokal la, limyè reflete nan pati a ki pa pwen fokal la pwoteje pa mikropor. Se poutèt sa, lè obsève yon echantiyon ki genyen twa dimansyon, se yon imaj tankou sa ki fòme apre yo fin koupe echantiyon an ak konsantre nan fòme (Figi 5). Efè sa a rele lokalizasyon optik, ki fè pati youn nan espesyalite yo nan sistèm optik konfokal.
8. Konsantre k ap deplase fonksyon memwa
Sa yo rele limyè reflete deyò konsantre a pwoteje pa mikropor yo. Nan lòt men an, li ka konsidere ke tout pwen sou imaj la ki te fòme pa sistèm nan optik konfokal kowenside ak konsantre nan. Se poutèt sa, si echantiyon ki genyen twa dimansyon deplase sou direksyon aks Z (aks optik), imaj la pral akimile ak estoke nan memwa a, ak zui pral evantyèlman jwenn imaj la ki te fòme pa konyensidans echantiyon an antye ak konsantre nan. . Nan fason sa a, fonksyon an nan pwofondè enfini nan konsantre yo rele fonksyon memwa mobil.
9. Sifas fòm mezire fonksyon
Nan fonksyon k ap deplase konsantre, yo ka mezire fòm sifas echantiyon an nan yon fason ki pa kontak lè w ajoute yon bouk anrejistreman wotè. Ki baze sou fonksyon sa a, li posib pou anrejistre kowòdone Z-aks ki fòme pa gwo valè klète zui nan chak pixel, epi ki baze sou enfòmasyon sa a, yo ka jwenn enfòmasyon ki gen rapò ak fòm sifas echantiyon an.
10. wo-presizyon mikwo-gwosè fonksyon mezi
Inite k ap resevwa limyè a adopte yon Capteur D' CCD ki genyen yon dimansyon, kidonk li ka afekte pa enklinezon optik nan aparèy optik la, se konsa ke mezi-wo presizyon ka ranpli. Anplis de sa, paske se fonksyon an memwa deplase konsantre ak pwofondè konsantre reglabl adopte an menm tan an, erè nan mezi ki te koze pa konpanse konsantre ka elimine.
11. Analiz imaj ki genyen twa dimansyon
Sèvi ak fonksyon an mezire fòm sifas, imaj ki genyen twa dimansyon nan sifas echantiyon an ka fasil fè. Se pa sèlman sa, men tou, anpil kalite analiz ka fèt, tankou: mezi brutality sifas, zòn, volim, sifas, sikilè, reyon, longè zui, perimèt, sant gravite, imaj tomografik, transfòme FFT, liy. mezi lajè ak sou sa.
Mikwoskòp optik konfokal lazè ka itilize pa sèlman pou obsève mòfoloji selilè, men tou pou analiz quantitative konpozan byochimik nan selil, estatistik dansite optik ak mezi mòfoloji selilè.
